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Prominence nano

简要描述:蛋白组学分析,是蛋白质分析的一项非常重要的技术,一般会使用ESI-LCMS或者MALDI-TOFMS

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更新时间

2024-10-25

浏览次数

98

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详细介绍

蛋白组学分析,是蛋白质分析的一项非常重要的技术,一般会使用ESI-LCMS或者MALDI-TOFMS。许多蛋白质和肽极其微量,需要质谱仪的高灵敏度检测才能发现,而这就需要一个非常稳定的前端HPLC支持此微量检测。

Prominence nano系列是一套纳升LC系统,可在纳升流量下进行精准流速的溶剂输送。按照应用不同,可以配置成1D和2D系统。

Prominence nano具备纳升流速下的高保留时间重复性,非常低的系统死体积和极低的交叉污染等特点。

基本性能

· 纳升流速传感器可保证精确的纳升溶剂传输
· RFC系统大大降低溶剂消耗
· 低容量纳升阀---保证了低的系统死体积
· 高灵敏度分析

纳米辅助控制软件的直观操作

· 图形界面直观操作
· 可视化监控仪器运行状态
· 二维参数的便捷设置

蛋白质组分析的应用

· 高保留时间重复性
· 二维LC的高分辨率

纳升流速传感器可保证精确的纳升溶剂传输

LC-20AD nano采用了新的RFC技术,可对每一个泵进行独立的流速控制,在纳升流速下保证好的流量精度。的RFC系统是由高精度的纳升流速感应器控制,确保在任何时间精准的流速测量。同时,流量传感器配置了精确的温度控制机制,以减少不确定的环境因素对溶剂输送的影响。LC-20AD nano在梯度分析能保证很好的流速稳定性,在300nL/min时候保留时间重复性的RSD小于0.2%。

RFC系统的原理


Prominence nano

泵内配置了一个流速传感器,可持续监测泵输出的纳升流速。为了保证流速在设定的范围内,采用反馈控制模式,传感器的监测到真实流速后可以自动调整分流比例,从而保证流速的准确性。另外,分流后的流动相在混合前就经过回流管路回到溶剂瓶,不会浪费溶液。


低溶剂消耗


Prominence nano

RFC系统可确保每个泵输出的溶剂分流后又回到流动相瓶中。就算在高压梯度分析中,两种溶剂在分离后并不会像废弃物一样排出,从而降低溶剂消耗并减少对环境的影响。


Prominence nano

FCV纳升阀,低死体积


Prominence nano
FCV nano

FCV纳升阀体积为25nL,在纳升范围内几乎不会展宽。在纳升LC使用捕集柱进样和二维系统中,FCV 纳升阀是的。FCV 纳升阀通过使用强化的定子和聚醚醚酮的转子,可以大大降低样品的吸附,同时获得很好的耐用性。


高灵敏度分析


Prominence nano
SIL-20AC

SIL-20AC的直接进样功能与FCV纳升阀的低扩射性能相结合可实现微量体积样品的进样分析。FCV纳升阀后连接的捕集柱可以对进样的样品进行捕集浓缩,从而实现高灵敏度分析。而且,SIL-20AC被为交叉污染的自动进样器,这些特征都可以满足高灵敏度MS分析的要求。


2维LC的辅助控制软件

辅助控制软件可对2维LC进行便捷设置,在软件图形界面上可轻松对2维HPLC的进行复杂梯度编程,设定流速等,然后生成方法文件并下载至仪器中进行控制,而图形化的流路图和梯度曲线代表当前状态。简便的设置可避免单独使用LC控制软件带来的一系列的操作问题。

Prominence nano

Prominence nano 2D系统在线的结合了离子交换和反向色谱模式(如下图所示),每种色谱模式都独立运行,两种模式的结合可进行的分离。Prominence nano 2D系统可与配备Nano ESI源的LCMS系统联用进行湿法蛋白组学分析,也可以与点靶仪和MALDI-TOF质谱联用进行干法蛋白组学分析。

Prominence nano

易操作的一维体系


Prominence nano
Nano-Assist一维LC设置图

1D 纳升LC系统对于确认SDS PAGE分离前的蛋白质十分有效,1D系统只需要非常简单的操作就可以实现。当然,辅助控制软件在1D和2D系统中使用都是十分方便的。


高保留时间重复性

蛋白质组分析需要比较不同样本的色谱峰差异,而样本中又存在许多特征相似的多肽,对保留时间的重复性要求非常高。Prominence nano系统的高重复性可保证蛋白质组分析的高精数据,配置了RFC系统的LC-20AD nano可以在流速为300 nL/min获得RSD不超过0.2% 的保留时间重复性。

Prominence nano
牛血清白蛋白(BSA)酶解样品的重复性

2维 LC的高分辨率


Prominence nano
牛血清白蛋白(BSA)酶解样品的重复性

在蛋白质组学分析时,单一的1D反相分离不足以提供足够的色谱峰容量;所以,为了实现复杂样品的分离,需要进行2D分离以保证足够的峰容量。Prominence nano系统可以进行2D分析,结合阳离子交换和反相模式,为蛋白质组学分析提供所需的核心技术。下图为200fmol酵母蛋白质的分析图,1D分离中的未分离组分在2D中继续分离成几个组分,2D分离的峰容量大大大于1D所获得的效果。


分析条件

一维

PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.)

流动相

甲酸铵缓冲液
浓度STEP梯度

流速

40 nL/min

捕集柱

(5 mmL.×300 m I.D.)
L-column (micro)

捕集时长

5分钟

脱盐溶剂

水/蚁酸=100/0.1

脱盐流速

L/min

脱盐时长

5分钟

2维

PicoFrit (100 mmL.×75 m I.D.)

流动相

梯度洗脱
A)水/乙腈/蚁酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蚁酸=5/95/0.1(v/v)

流速

600nL/min

温度

温度

检测

LCMS-IT-TOF

样本

酵母蛋白中的蛋白
(相当于200 fmol的)

* 分别利用1维和2维中不同类型的柱体进行其他组合的分离模式也是可行的。在这种情况下,分离或检测方法由于使用的移动相分离模式或类型之间的相互作用,可能会有一些限制。

连接MALDI-TOFMS使用


Prominence nano

Prominence nano系统不仅仅可以通过nano ESI接口连接LCMS使用,还可连接到配有自动点靶仪的MALDI-TOFMS仪器。为了准确分析MALDI靶的每个色谱峰,需要LC能够在1nL到1µL范围之内精确控制流速,Prominence nano系统的满足了此需要。


Prominence nano
酶解BSA样品的UV色谱图(500fmol)

分析条件

检测器

UV220 nm

MonoCap for Fast-flow 快速MonoCap
(250 mmL. × 100 µm I.D.)

流动相

1、水/乙腈/蚁酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蚁酸=5/95/0.1(v/v)
2、梯度洗脱

流速

1 µL/min

温度

环境温度

捕捉柱

ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.)

点靶间隔

12 秒的点断
每点液体:200nL(不包括基质)


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